蕙兰组织培养工厂化生产技术

1.开始诱导(1)母株的选择。母株的选择应遵循三个基本原则：1.整个群体表现出该品种的典型特征；2. 2.群体生长良好，没有普遍发生特定病害，特别是东亚兰花叶病毒和萝卜环斑病毒3.在符合上述条件的群体中选择性状优良的健壮单株作为母株。 (2)外植体的处理。选肥壮、叶子不完整的营养芽（不要选花芽）作为外植体，先剥去23片外叶，然后握住兰花叶芽尖，剪去基部、损伤、老化组织，最后一层层剥去外面的叶子，直到露出小顶芽和小侧芽。然后将外植体放在超净工作台上用70%酒精浸泡30秒，用无菌水冲洗干净，再用0.1%氯化汞溶液浸泡约8分钟，再用无菌水冲洗3分钟。 ~4次，然后小心地剪掉无菌接种盘上的顶芽和侧芽。 (3)圆球茎的诱导驯化。将切下的顶芽和侧芽插入诱导培养基中，基部朝下，芽尖稍显露。然后置于培养室培养，光照强度1000-1500勒克斯，光照时间每天14小时，培养温度25左右。 10天后，芽开始萌发，诱导率达85%以上。圆球茎诱导过程中，约80%的芽萌发，容易长成幼苗。诱导30天后，当幼苗长至4厘米，基部膨大时，将幼苗从基部剪下，将膨大的基部纵向切成厚度为34毫米的薄片，切下放回同样的新鲜培养基中，3035天后，即可从下端切口处长出类似愈伤组织的圆形球茎，顶芽诱导率最高，诱导速度也最快，其次是侧芽。

2、继代增殖与幼苗分化将圆球茎接种于继代培养基中，然后置于培养室中培养。培养温度25左右，光照强度3000勒克斯，光照时间每天10小时。每4550天继代一次，倍增倍数可达10倍以上。继代初期浓度1.510-6210-6的6-BA（植物生长调节剂）可快速积累物料。随着继代次数的增加，特别是经过15代或变异株开始出现后，只能使用0.510-61.510-6浓度的6-BA（植物生长调节剂），生产过程中应及时淘汰变异的圆球茎。变异的圆球茎表面仅光滑，无芽尖，不能分化成芽。当球茎传代到所需数量时，直接将完整的球茎转移到新鲜的增殖培养基上，不要纵向切割，也不要剪掉芽尖，以便球茎表面的芽尖可以直接区分并发芽成幼苗。

3、生根炼苗当幼苗长到3厘米高，有23片叶时，可将幼苗小心地从基部剪掉，转移到壮苗生根培养基上，然后放入栽培室进行栽培。培养温度25-28，光照强度5000-6000勒克斯，光照时间每天12小时。 20天左右开始生根，35天即可炼苗。兰花瓶苗移栽前，将其移入遮阳棚内，置于有自然散射光（7000-8000勒克斯）、每天光照8-12小时的环境中，连续15-20天，可显着提高苗木质量。瓶苗及定植成活率。当瓶苗叶片呈深绿色、叶片坚挺、植株健壮时，即可出瓶移栽。